PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho Y.K.P., Argôlo-Neto N.M., Ambrósio C.E., Oliveira L.J., Rocha A.R., Silva J.B., Carvalho M.A.M. & Alves F.R. 2015. Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831). Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):590-598. Departamento de Morfisiologia Veterinária, Universidade Federal do Piauí, Campus Universitário Ministro Petrônio Portella, Bairro Ininga, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: flavioribeiro@ufpi.edu.br The study aimed to isolate, expand, differentiate and characterize progenitor cells existent in the dental pulp of agouti. The material was washed with PBS solution and dissociated mechanically with the aid of a scalpel blade on plates containing culture medium D-MEM/F-12, and incubated at 5% CO2-37°C. The growth curve, CFU assay, osteogenic/adipogenic differentiation and characterization were obtained from the isolation. The cells began to be released from the explant tissue around the 7th day of culture. By day 22 of culture, cells reached 80% confluence. At the UFC test, 81 colonies were counted with 12 days of cultivation. The growth curves before and after freezing showed a regular growth with intense proliferation and clonogenic potential. The cell differentiation showed formation of osteoblasts and fat in culture, starting at 15 days of culture in a specific medium. Flow cytometry (FACs) was as follows: CD34 (positive), CD14 (negative), CD45 (negative), CD73 (positive), CD79 (negative), CD90 (positive), CD105 (positive), demonstrating high specificity and commitment of isolated cells with mesenchymal stem cells strains. These results suggest the existence of a cell population of stem cells with mesenchymal features from the isolated tissue in the explants of agouti dental pulp, a potential model for study of stem cell strains obtained from the pulp tissue.

• Dasyprocta prymnolopha dental pulp polpa dentária

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho Y.K.P., Argôlo-Neto N.M., Ambrósio C.E., Oliveira L.J., Rocha A.R., Silva J.B., Carvalho M.A.M. & Alves F.R. 2015. Isolation, expansion and differentiation of cellular progenitors obtained from dental pulp of agouti (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831). [Isolamento, expansão e diferenciação de progenitores celulares obtidos da polpa dentária de cutia (Dasyprocta prymnolopha Wagler, 1831).] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):590-598. Departamento de Morfisiologia Veterinária, Universidade Federal do Piauí, Campus Universitário Ministro Petrônio Portella, Bairro Ininga, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: flavioribeiro@ufpi.edu.br Este estudo teve como objetivo isolar, expandir, diferenciar e caracterizar células progenitoras existentes na polpa dentária de cutia. O material foi lavado em solução de PBS e dissociado mecanicamente, com o auxílio de uma lâmina de bisturi, em placas contendo meio de cultura D-MEM/F-12, e incubadas em 5% de CO2-37⁰C. A curva de crescimento, o ensaio de CFU, a diferenciação osteogênica/adipogênica e a caracterização foram obtidas a partir do isolamento. As células começaram a ser liberadas, a partir do explante, em torno do sétimo dia de cultura. A partir do 22o dia, as células atingiram 80% de confluência. No teste para UFC, 81 colônias foram contadas aos 12 dias de cultivo. As curvas de crescimento pré- e pós-congelamento apresentaram crescimento regular, com intensa proliferação e potencial clonogênico. A diferenciação das células mostrou a formação de osteoblastos e de células de gordura, a partir de 15 dias de cultura em meio específico. A citometria de fluxo (FACS) apresentou-se como segue: CD34 (positivo), CD14 (negativo), CD45 (negativo), CD73 (positivo), CD79 (negativo), CD90 (positivo), CD105 (positivo), demonstrando a grande especificidade e comprometimento das células isoladas com linhagens de células-tronco mesenquimais. Estes resultados sugerem a existência de uma população de células-tronco mesenquimais isolada a partir de explantes da polpa dentária cutia, um modelo potencial para o estudo de linhagens de células-tronco obtidas a partir do tecido pulpar.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Peres K.C., Trinca V., Oliveira F.P., Oliveira L.J., Bressan F.F., Pimentel J.R.V., Meirelles F.V. & Pereira F.T.V. 2015. [Caracterization of caveolin -1 and -2 proteins in cloned and transgenic placenta of cattle.] Caracterização das proteínas caveolinas -1 e -2 na placenta de conceptos bovinos clonados transgênicos. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):477-485. Curso de Zootecnia, Faculdade Estadual Paulista, Rodovia Comandante João Ribeiro de Barros Km 651, Dracena, SP 17900-000, Brazil. E-mail: verechia@gmail.com The transgenic application of green fluorescent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these animals present problems during its development. With this model’s support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytosis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples was cut and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS), at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 (CAV -1 and CAV- 2). The caveolins -1 were found in fetal and maternal villi, but its strongest staining was observed in the endometrial stroma. The caveolins -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane, and specifically in giant trophoblastic binucleated cell. Therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and -2 (CAV-1 and CAV-2) are part of the caveolae composition and important structures related to the molecule transfer to the fetus, nourish it through endocytosis and pinocytosis.

• Caveolin-1 -2 proteins placentation proteínas caveolinas -1 proteínas caveolinas -2 placentação

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Peres K.C., Trinca V., Oliveira F.P., Oliveira L.J., Bressan F.F., Pimentel J.R.V., Meirelles F.V. & Pereira F.T.V. 2015. [Caracterization of caveolin -1 and -2 proteins in cloned and transgenic placenta of cattle.] Caracterização das proteínas caveolinas -1 e -2 na placenta de conceptos bovinos clonados transgênicos. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):477-485. Curso de Zootecnia, Faculdade Estadual Paulista, Rodovia Comandante João Ribeiro de Barros Km 651, Dracena, SP 17900-000, Brazil. E-mail: verechia@gmail.com A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende-se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana córioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação à proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo estruturas importantes e relacionadas com a transferência de moléculas para o feto, realizando a nutrição do mesmo mediante endocitose e pinocitose.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rodrigues G.C., Oliveira L.J., Monteiro J.M., Lima A.R., Gonçalez P.O., Hernandez-Blazquez F.J., Leiser R. & Kfoury Jr J.R. 2010. Ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood cells. [Caracterização ultra-estrutural das células sanguíneas do cordão umbilical bovino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):897-902. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando de Marques Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, 05508-270, Brazil. E-mail: jrobertok@usp.br The umbilical cord blood (UCB) is an important source of pluripotent stem cells, which motivated researches on ontogeny and transplantation. The morphological characterization of umbilical cord cells is the first step to establish subsequent experiments on these areas. Although some information on humans can be found, no data on UCB is available for bovines. Therefore, this work is the first attempt to conduct an ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood. Blood was collected from the umbilical cord of twenty fetuses by punction of the umbilical vein. Samples were processed for whole leucocytes observation by centrifugation and the buffy coat was collected. Cells were washed and pelleted and prepared according to the standard protocol of the transmission electron microscopy. The presence of cells with morphologic characteristics compatible with the precursors from the erythrocytic, neutrophilic, eosinophilic, basophilic, and lymphocytic lineages was observed. Atypical cells with peculiar morphological features, strongly similar to apoptotic cells, were seen. Bovine neutrophils with three types of cytoplasmic granules were also found in the blood. The ultrastructural characteristics of observed bovine UCB cells where similar to those found in other species, suggesting that bovines could possibly constitute an experimental model for approaches on UCB cells research.

• Umbilical cord blood cells haematopoietic progenitor cells cordão umbilical células progenitoras hematopoiéticas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rodrigues G.C., Oliveira L.J., Monteiro J.M., Lima A.R., Gonçalez P.O., Hernandez-Blazquez F.J., Leiser R. & Kfoury Jr J.R. 2010. Ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood cells. [Caracterização ultra-estrutural das células sanguíneas do cordão umbilical bovino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):897-902. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando de Marques Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, 05508-270, Brazil. E-mail: jrobertok@usp.br O sangue de cordão umbilical (SCU) é uma importante fonte de células progenitoras pluripotentes, que motiva pesquisas em ontogenia e transplantes. A caracterização morfológica das células de cordão umbilical é o primeiro passo para se estabelecer experimentos subsequentes nessas áreas. Embora algumas informações sobre SCU em humanos possam ser encontradas, não existe nenhuma informação disponível sobre elas em bovinos. Portanto, este trabalho é a primeira tentativa de se conduzir uma caracterização ultra-estrutural do sangue de cordão umbilical bovino. O sangue foi coletado do cordão umbilical de 20 fetos por punção da veia umbilical. As amostras foram processadas para observação dos leucócitos totais por centrifugação pela coleta do botão leucocitário. As células foram lavadas, peletizadas e preparadas de acordo com protocolo padrão para microscopia eletrônica de transmissão. A presença de células com características morfológicas compatíveis com precursores das linhagens eritrocítica, neutrofílica, eosinofílica, basofílica e linfocítica foram observadas. Células atípicas com características morfológicas peculiares muito semelhantes a células em apoptose foram observadas. No sangue do cordão umbilical também foi encontrado neutrófilos bovinos apresentando três tipos de grânulos citoplasmáticos. As características ultra-estruturais do SCU bovino foram semelhantes às encontradas em outras espécies, sugerindo que esta espécie possa servir como modelo experimental para abordagens em pesquisas sobre sangue de cordão umbilical.